过氧化氢含量（H₂O₂）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

H₂O₂ 是生物体内最常见的活性氧分子，主要由 SOD 和 XOD 等催化产生，由 CAT 和 POD 等催化降解。H₂O₂ 不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H₂O₂ 可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H₂O₂ 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子，。

测定原理：

H₂O₂ 与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在 415nm 有特征吸收。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、丙酮 60mL、浓盐酸 10mL、研钵和冰。

试剂的组成和配制：

试剂一：丙酮 60mL×1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 10mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃
保存；(溶解时间较长，约 30min，可 40℃-60℃加热溶解，务必提前准备)
试剂三：15mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：60mL×1 瓶，4℃保存；
H₂O₂ 提取：
1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；用试剂一定容至 1mL；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.  组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约
0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆；转移至 EP 管中，用试剂一定容至 1mL，8000g
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂二、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂

试剂名称（μL）	测定管	对照管
样本	吸取的量的为全部上清液
试剂一		1000
试剂二	100	100
试剂三	200	200

4000g，25℃离心 10min，弃上清，留沉淀

试剂四

1000

1000

加入试剂四溶解沉淀后，室温静置 5min，倒入比色皿中，测定 415nm 处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算 ΔA＝A 测定-A 对照。