羊源性成分核酸检测试剂盒（恒温荧光法）
 产品说明
             物种鉴定系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、饲料等样品中动物源性成分的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于羊源性成分的检测，检出限为0.5%。
◆ 产品组成（48测试）

021031M
试剂	含量
A-羊源-I	1200μL × 1支
B-I	55μL × 1支
C-I	1200μL × 1支
NG-I	50μL × 2支
PG-羊源-I	50μL × 1支

◆ 适用仪器
    Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c等恒温荧光检测仪，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96等荧光PCR仪。 
◆ 自备耗材和仪器
①灭菌1.5mL或2.0mL离心管；②灭菌0.2mL PCR管或八联管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴
◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
   1）第一区：试剂准备区。
   2）第二区：样本制备区。
 3）第三区：模板添加区。
   4）第四区：扩增及产物分析区。
   ★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
◆ 样品处理
参照《SB/T 10923-2012 肉及肉制品中动物源性成分的测定 实时荧光PCR法》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。
①样品的采集和制备是动物源性鉴别的重要步骤，为防止交叉污染，应使用一次性消耗品，研钵应经160℃干烤2h，其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用1%次氯酸钠溶液浸泡。②取样应尽量采取肌肉组织，对于同一批样品，应多点采集合并后，作为一份样品进行均质，提取DNA。③采样过程应快速完成，将采取的样品迅速放入组织搅碎机中进行均质成糜状，充分混匀，取0.1g充分混匀的样品，采用液氮研磨或均质器均质。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
将试剂完全解冻，各组分离心30s。
1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
若有N个待检样品，则参照下表，按照N+2个数量计算各组分用量（N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照），将反应液置于0.6ml或者1.5ml离心管中，涡旋混匀，离心30秒，分装于0.2ml PCR管中，并向每管加入1滴C-I（约20μl）。

试剂	使用量
A-羊源-I	22×(N+2)μL
B-I	1×(N+2)μL
反应液总体积	23×(N+2)μL

2．模板制备（样本制备区）
建议使用试剂配套动物源性成分DNA提取系列产品，具体过程详见产品说明书。
3．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）
      在步骤1中已含有反应液的PCR管中加入2μL模板，顺序为NG-I、待测样品模板、PG-羊源-I。涡旋混匀30s，离心1min，立即进行扩增反应。
4. 扩增反应（扩增及产物检测区）
①恒温仪器63℃条件下反应45min。
        ②若使用荧光定量PCR仪，则荧光基团选择FAM，淬灭基团选择None，将63℃ 15 s，63℃ 45 s作为一个循环，于63℃ 45 s处收集荧光信号，45个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有羊源性成分；若显示“阴性”，则样品中不含有羊源性成分或含量低于检测限。
②在荧光定量PCR仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有羊源性成分；若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有羊源性成分或含量低于检测限。
  

• NG反应管结果显示“阴性”，PG反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。