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诺如病毒GII型RNA核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
发布时间:2018-07-16 10:25 | 点击次数:
诺如病毒GII型RNA核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
◆ 产品说明
致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术,可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增,仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化,自动判读结果。本产品用于诺如病毒GII型RNA的检测。检出限为103 CFU/ml。
◆ 产品组成(96测试)
012121L | |||
试剂 | 含量 | ||
A-GII-I | 1200μL × 2支 | ||
B-I | 55μL × 2支 | ||
C-I | 1200μL × 2支 | ||
R-I | 12μL × 2支 | ||
NG-I | 50μL × 3支 | ||
PG-GII-I | 50μL × 2支 |
Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c等恒温荧光检测仪,ABI 7500,LightCycler480,CFX 96等荧光PCR仪。
◆ 自备耗材和仪器
①灭菌1.5mL或2.0mL离心管;②灭菌0.2mL PCR管或八联管;③冰盒;④移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;⑤离心机;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴
◆ 注意事项
1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
1)第一区:试剂准备区。
2)第二区:样本制备区。
3)第三区:模板添加区。
4)第四区:扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
7. 检出限为103 CFU/ml是以1 ml 103 CFU/ml增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组DNA作为模板。
◆ 样品处理
参照GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行样品前处理。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
将试剂完全解冻,各组分离心30s。
1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):
若有N个待检样品,则参照下表,按照N+2个数量计算各组分用量(N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照),将反应液置于0.6ml或者1.5ml离心管中,涡旋混匀,离心30秒,分装于0.2ml PCR管中,并向每管加入1滴C-I(约20μl)。
试剂 | 使用量 |
A-GII-I | 22×(N+2)μL |
B-I | 0.8×(N+2)μL |
R-I | 0.2×(N+2)μL |
反应液总体积 | 23×(N+2)μL |
- 模板制备(样本制备区)
3.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
在步骤1中已含有反应液的PCR管中加入2μL模板,顺序为NG-I、待测样品模板、PG-GII-I。涡旋混匀30s,离心1min,立即进行扩增反应。
4. 扩增反应(扩增及产物分析区)
①恒温仪器63℃63℃条件下反应45min。
②若使用荧光定量PCR仪,则荧光基团选择FAM,淬灭基团选择None,将63℃ 15 s,63℃ 45 s作为一个循环,于63℃ 45 s处收集荧光信号,45个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
①仪器自动判定结果,若显示“阳性”,则样品中含有诺如病毒GII型RNA病毒;若显示“阴性”,则样品中不含有诺如病毒GII型RNA病毒或含量低于检测限。
②在荧光定量PCR仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有诺如病毒GII型RNA病毒;若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有诺如病毒GII型RNA病毒或含量低于检测限。
- NG反应管结果显示“阴性”,PG反应管结果显示“阳性”,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。